Как да се създаде самостоятелна Patch - Clamp Experiment

експеримент кръпка - скоба се използва за измерване на единични живи клетки. Той прави това с много фина пипета проведе в тясно сътрудничество срещу мембраната на една клетка е ( на външната защитна обвивка ) . Откриването на това пипета само около 1 микрон ( една хилядна от милиметъра ) и се контролира с оптически микроскоп . Клетките се държат еднакво в чиния , като се използва клетъчна Detacher , като трипсин . A определена клетка е избран и върха на пипетата се поставя върху клетъчната мембрана. A уплътнение се формира с помощта на засмукване и част от мембраната е изготвен в pipette.Things ви е нужно
Cell плоча
фосфатен буферен физиологичен разтвор , или PBS ( без калций и магнезий)
Trypsin
инкубатор
10 - милилитрова пипета
НЕК (човешки епидермални keratinocyctes ) среда
фетален телешки серум ( FCS)
Центрофуга
външно решение за записване капачка
Patch скоба чип
Twist <Бразилски> електрод MarketBook.bg: Покажи повече инструкции
е. 1

Снабдете се с плоча за клетки. Измийте плаката два пъти с 10 мл PBS (фосфатно буфериран физиологичен разтвор ) без калций и магнезий. Добавя се 2 милилитра Detacher ( трипсин ) . Плочата се инкубира в продължение на три минути при 37 градуса по Целзий . Плаката се изследва под микроскоп , за да се гарантира, че клетките са откъснати . Внимателно се премести на плочата да се отделят всички клетки от дъното на плаката. Добавя се 10 милилитра от НЕК ( човешки епидермални keratinocyctes ) и FCS среда ( фетална крава серум) . Използвайте 10 - милилитрова пипета , за да преместите клетките нагоре и надолу.

2

Спазвайте клетките под микроскоп , за да се гарантира, че те са единични клетки. Пипета използване на 10 - милилитрова пипета , докато клетките са единични, ако е необходимо. Центрофугирайте клетките в продължение на две минути при 1000 оборота в минута . Изхвърлете супернатанта. Поставят се клетките в 10 милилитра на фетален телешки серум. Центрофугирайте клетките отново в продължение на две минути при 1000 оборота в минута . Изхвърлете супернатанта. Поставят се клетките в 200 микролитра на външен разтвор запис . Спазвайте клетките под микроскоп за единични клетки с гладка мембрана.


3

Поставете физиологичния разтвор вътре чип кръпка скоба . Добави спад на вътреклетъчния електролитен разтвор на долната част на чип с помощта на пипета. Монтирайте чипа върху капачката обрат. Капачката на усукване трябва да съдържа референтния електрод и смукателния тръбопровод . Добави капка извънклетъчен електролитен разтвор в началото на чип с помощта на пипета. Електролитния разтвор позволява на чипа да осъществи контакт с електрода. Добавят се 5 микролитра от клетъчната суспензия на физиологичния разтвор в чипа . Поставете една клетка с помощта на засмукване чрез пипета. Засмукване може да се извършва ръчно, като смучене на въздух през пипетата . Позициониране на съпротивлението на клетъчни увеличения да се оформи уплътнение . Печатът дава възможност за изследване на цялата клетка.